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土壤外丹參部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量檢測
添加時間:2019-06-28

  摘    要: 建立了使用HPLC同時測定丹參地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸含量的分析方法。在流動相甲醇 (A) -0.8%冰乙酸水溶液 (B) 梯度洗脫, 流速1 m L/min, 柱溫35℃, 檢測波長250 nm色譜條件下測定結果表明, 丹酚酸B和迷迭香酸的質量濃度分別在14.0~700.0μg/m L (r=1.000 0) 和12~600μg/m L (r=0.999 6) 的線性范圍內, 有良好的線性關系;丹酚酸B和迷迭香酸的檢出限LOD (S/N=3) 分別為0.2, 0.3μg/m L, 定量限LOQ (S/N=10) 分別為1.0, 1.0μg/m L。丹酚酸B和迷迭香酸的平均加樣回收率分別為99.16% (RSD=0.735%) 和101.11% (RSD=2.11%) 。該方法操作簡便、分析效果好、靈敏度高, 具有良好的重復性和回收率, 可同時測得丹參地上部分中水溶性成分丹酚酸B和迷迭香酸的含量。

  關鍵詞: 丹參; 丹酚酸B; 迷迭香酸; HPLC;

  Abstract: To develop a HPLC method for investigate the determination of the content of salvianolic acid B and rosmarinic acid in the aerial part of Salvia miltiorrhiza. Gradient elution in mobile phase methanol (A) -0.8% aqueous glacial acetic acid (B) , flow rate 1 m L/min, column temperature 35 ℃, detection wavelength 250 nm. The results showed that a good linearIity was obtained over 14.0~700.0 μg/m L (r=1.000 0) for salvianolic acid B, 12~600 μg/m L (r=0.999 6) for rosmarinic acid, respectively. The average recoveries of salvianolic acid B and rosmarinic acid were 99.16% (RSD=0.735%) and 101.11% (RSD=2.11%) , respectively. The HPLC method was simple and easy to perform, and the analytical effect is good. The content of two water-soluble components, salvianolic acid B and rosmarinic acid, can be measured simultaneously.

  Keyword: Salvia miltiorrhiza; salvianolic acid B; rosmarinic acid; HPLC;

  丹參 (Salvia miltiorrhiza Bge) 為唇形科多年生草本植物, 主產于陜西、山東、山西、河南、河北等地[1], 以根入藥, 具有祛瘀止痛、活血通經、清心除煩等功效[2], 是心腦血管病及多種炎癥的常用藥材。由于丹參地上部分約占全草的2/3, 而且每年均可采收, 有更豐富的資源, 但丹參地上部分大多被遺棄, 未得到有效利用, 造成藥用資源的浪費和生態環境的污染[3]。研究表明[4], 丹參地上部分含有豐富的丹酚酸類[5]、黃酮類[6]、三萜類等化學成分, 具有較強的抗氧化[7]、降血糖等活性, 并能有效改善腦梗塞、腦缺血等癥狀[8], 其中丹酚酸B和迷迭香酸等水溶性成分[9]在臨床上廣泛用于治療心血管系統疾病[10]。為了開發丹參地上部分藥用資源利用, 采用HPLC法對丹參地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量進行了分析評價。

  1 、材料與方法

  1.1、 儀器與試劑

  Agilent 1200型高效液相色譜儀, 美國安捷倫公司產品;KQ3200DE型數控超聲波清洗器, 昆山超聲儀器限公司產品;Sarturius BT 124S/BT 25S型電子天平。

土壤外丹參部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量檢測

  丹參地上部分由密山市康華中藥材種植專業合作社提供的2017年8月8日采集品;甲醇及其他試劑均為色譜分析純;水為娃哈哈純凈水;對照品丹酚酸B (98.51%, MUTS-18040503) , 成都曼思特生物科技有限公司提供;迷迭香酸 (>97%, J1613019) , 阿拉丁試劑有限公司提供。

  1.2 、試驗方法

  1.2.1、 色譜條件

  色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18型 (4。6 mm×250 mm, 5 m) ;流動相:甲醇 (A) -0。8%冰乙酸水溶液 (B) 梯度洗脫 (0~3 min, 30%A→31%A;3~53 min, 31%A→35%A, 53~65 min, 35%A→40%A, V/V) ;流速1 m L/min, 進樣量5μL, 柱溫35℃, 檢測波長250 nm。

  1.2.2、 丹酚酸B和迷迭香酸對照品溶液配制

  精密稱取丹酚酸B和迷迭香酸對照品7.0 mg和6.0 mg, 分別置于10 m L容量瓶中, 加適量甲醇溶解并稀釋至刻度, 制得質量濃度分別為0.70 mg/m L和0.60 mg/m L的對照品溶液。

  1.2.3、 供試品溶液配制

  取干燥至恒質量的丹參地上部分, 精密稱取粉碎后的丹參地上部分粉末8.42 g, 置于帶有回流冷凝器的250 m L圓底燒瓶中, 每次加入80.0 m L甲醇, 加熱回流1.5 h, 回流提取3次, 過濾后合并濾液濃縮至恒質量, 得丹參地上部分甲醇提取物。精密稱取上述醇提物, 配制成質量濃度為5 mg/m L的供試品溶液, 用微孔濾膜 (0.22μm) 濾過, 備用。

  1.2.4、 色譜分析

  精密吸取供試品溶液、丹酚酸B和迷迭香酸對照品溶液各5μL, 在“1。2。1”項的色譜條件下進行分析, 得供試品溶液色譜圖和丹酚酸B (DB) 和迷迭香酸 (MD) 的混合對照品溶液色譜圖。

  供試品溶液色譜圖見圖1, 迷迭香酸 (MD) 的混合對照品溶液色譜圖見圖2。

  圖1 供試品溶液色譜圖
圖1 供試品溶液色譜圖

  2 、結果與分析

  2.1、 線性關系及檢測限和定量限

  精密移取丹酚酸B (0.70 mg/m L) 和迷迭香酸 (0.60 mg/m L) 貯備液適量, 分別用甲醇稀釋至質量濃度為14.0, 35.0, 70.0, 140.0, 700.0μg/m L和12.0, 30.0, 60.0, 300.0, 600.0μg/m L的對照品溶液, 精密吸取上述溶液各5μL, 進行高效液相色譜分析, 連續進樣3次, 記錄峰面積。以質量濃度為橫坐標, 所對應的峰面積為縱坐標, 分別對丹酚酸B和迷迭香酸的質量濃度進行線性回歸分析, 得回歸方程分別為Y=1 177.1X+26.851, R2=1.0;Y=1 468.9X+112.21, R2=0.999 3。表明丹酚酸B的質量濃度14.0~700μg/m L, 迷迭香酸的質量濃度12~600μg/m L時有良好的線性關系。

  圖2 迷迭香酸 (MD) 的混合對照品溶液色譜圖
圖2 迷迭香酸 (MD) 的混合對照品溶液色譜圖

  經HPLC測定, 以信噪比 (S/N) 為3和10所對應樣品中該物質的質量濃度分別計算檢限測 (LOD) 和定量限 (LOQ) , 丹酚酸B和迷迭香酸的檢測限檢出限LOD (S/N=3) 分別為0.2, 0.3μg/m L;定量限LOQ (S/N=10) 分別為1.0, 1.0μg/m L。

  2.2 、精密度試驗

  精密吸取對照品溶液丹酚酸B和迷迭香酸5μL, 在“1。2。1”項的色譜條件下進行分析, 連續進樣3次, 記錄色譜峰面積。分析計算得丹酚酸B和迷迭香酸各峰面積的RSD分別為3。18%和1。99%, 精密度良好。

  2.3 、穩定性試驗

  分別精密吸取丹酚酸B和迷迭香酸對照品溶液5μL, 依次在0, 4, 8, 12, 16, 18, 24 h進樣分析, 記錄各色譜峰面積, 計算得其RSD分別為3.42%和3.85%, 表明2種對照品在24 h內都穩定。

  2.4、 樣品含量測定

  精密吸取供試品溶液5μL, 在“1。2。1”項的色譜條件下進行分析, 記錄色譜峰面積, 用標準曲線法計算丹參地上部分丹酚酸B和迷迭香酸含量分別為5。24%和0。59%。

  2.5 、重復性試驗

  取同一批樣品, 精密吸取供試品溶液5μL, 連續進樣6次, 記錄各色譜峰面積, 測定丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別為5。23%和0。59%, 其RSD分別為1。32%和1。14%。表明該方法重復性好。

  2.6 、加樣回收率試驗

  精密稱取同一批已知對照樣品含量80%, 100%, 120%的丹參地上部分, 共9份, 每3份1組, 分別加入對照品丹酚酸B和迷迭香酸 (質量濃度分別為0.12, 0.03 mg/m L) 1 m L進樣分析, 記錄色譜峰面積。結果表明, 丹酚酸B和迷迭香酸的平均回收率分別為99.16%和101.11%, 其RSD分別為0.735%和2.11%。

  3 、結論

  丹參作為常用傳統中藥, 市場上已開發出多種制劑, 但均以根入藥, 資源更為豐富的地上部分并未得到有效利用, 隨著臨床應用范圍的擴大, 亟需尋找新藥源。據文獻[11,12]可知, 丹參根部中丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別在1.81%~11.55%和0.11%~0.74%, 試驗以丹參地上部分為研究對象, 經HPLC法對由密山市康華中藥材種植專業合作社提供的丹參地上部分中丹酚酸B和迷迭香酸的含量進行分析, 得丹酚酸B和迷迭香酸的含量分別為5.24%和0.59%, 與根部含量相當, 表明丹參地上部分作為獲取丹酚酸類化學成分的新資源具有很好的應用前景。

  參考文獻

  [1]李生萍.丹參中有效成分的分離、提取、提純[J].中國醫藥指南, 2013, 11 (4) :78-79.
  [2]肖禾, 宋民憲, 賴娟.國家藥品標準中丹參的質量控制情況[J].中國藥事, 2006, 20 (1) :57-59.
  [3]段金廒, 宿樹蘭, 郭盛, 等.中藥資源產業化過程廢棄物的產生及其利用策略與資源化模式[J].中草藥, 2018, 20 (3) :298-300.
  [4] 孫國平, 徐亞莉, 司亞楠.丹參葉的研究進展[J].醫藥前沿, 2012 (2) :128-129.
  [5]沙秀秀, 宿樹蘭, 沈飛, 等.不同生長期丹參莖葉及花序中丹酚酸類化學成分的分布與積累動態分析評價[J].中草藥, 2015, 46 (2) :3 414-3 419.
  [6]李欣, 薛治浦, 朱文學.丹參不同部位總酚酸和總黃酮含量分析及其抗氧化活性研究[J].食品科學, 2011, 32 (3) :108-111.
  [7] Matkowski A, Sylwia Zielinska, Jan Oszmianski, et al.Antioxidant activity of extracts from leaves and roots of Salvia miltiorrhiza Bunge, S. przewalskii Maxim and S. verticillata L.[J]. Bioresour Technol, 2008 (16) :7 892-7 896.
  [8]張寒, 賈敏, 楊穎.丹參地上部分抗腦缺血活性部位篩選[J].中藥藥理與臨床, 2013, 29 (3) :133-136.
  [9]刁保忠, 靳維榮, 張文周.正交試驗優選丹參莖葉中丹參素和丹酚酸B的提取工藝研究[J].中華中醫藥雜志, 2013, 28 0:2 717-2 720.
  [10]楊志霞, 林謙, 馬利.丹參對心血管疾病藥理作用的文獻研究[J].世界中西醫結合雜志, 2012, 7 (2) :93-96.
  [11]李霞, 楊陽, 黃豆豆, 等.甘西鼠尾草藥材和提取物中迷迭香酸、丹酚酸B的含量測定[J].中國醫院藥學雜志, 2014, 34 (19) :1 634-1 638.
  [12]王招玉, 徐依萍, 焦蓉, 等.HPLC法同時測定丹參中原兒茶醛、迷迭香酸、丹酚酸A的含量[J].中國藥師, 2014, 17 (9) :1 473-1 475.

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