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用于Fe3+檢測的“兩面神”型金納米粒子比色傳感器設計
添加時間:2019-05-31

  摘    要: 制備了一種聚乙二醇 (PEG) 和檸檬酸根不對稱修飾的“兩面神”型金納米粒子 (Janus AuNPs) 比色傳感器, 并基于此建立了鐵離子 (Fe3+) 比色檢測的新方法。首先, 利用檸檬酸鈉還原法制備了粒徑相對較大的金納米粒子, 隨后, 以玻片為基底, 將大粒徑金納米粒子修飾在玻片上, 利用玻片掩蔽部分檸檬酸根位點, 并進一步在金納米粒子非接觸區域上修飾大量PEG鏈, 得到檸檬酸根和PEG不對稱修飾的Janus AuNPs。引入Fe3+后, 有限區域內的檸檬酸根誘導Janus AuNPs發生定向聚集, 形成金納米粒子寡聚體并在水溶液中保持穩定。Janus AuNPs溶液吸光度比值與Fe3+濃度在1μmol/L~10 mmol/L范圍內呈線性變化 (y=0.129x+0.317) , 檢出限為715 nmol/L。與同類方法相比, 該方法操作簡便、靈敏度高, 且可極大拓寬檢測的線性范圍。

  關鍵詞: “兩面神”型金納米粒子; 不對稱修飾; 定向聚集; 鐵離子; 比色傳感;

  Abstract: A novel colorimetric method for iron ion (Fe3+) detection was proposed by using asymmetrically modified Janus gold nanoparticles (Janus AuNPs) in this paper.Initially, citrate-stabilized AuNPs with relatively large size were prepared through reduction reaction.Then, the large sized citrate-stabilized AuNPs were immobilized on the glass slide, through which some binding sites on the surface of AuNPs were concealed.The stabilizing agent of polyethylene glycol (PEG) was further introduced onto the exposed surface of AuNPs to obtain the PEG and citrate asymmetrically modified Janus AuNPs.After the introduction of Fe3+, the aggregation behavior of Janus AuNPs was adjusted in an oriented and controllable manner to form oligomers which could remain stable in aqueous solution for a long time.Such an asymmetrical modification could significantly improve the dynamic detection range (1 μmol/L-10 mmol/L) of AuNPs based colorimetric assay.Meanwhile, a linear calibration curve, i.e.A750/A536=0.129c (μmol/L) +0.317 was also obtained, with a detection limit of 715 nmol/L.Compared with other nanoparticle-based colorimetric system for Fe3+detection, this method is simple and sensitive, and surprisingly broadens the linear range for detection.

  Keyword: Janus gold nanoparticles; asymmetrical modification; oriented aggregation; iron ion; colorimetric detection;

  鐵元素是地球上含量最豐富的元素之一, 也是人體必需的過渡金屬元素[1]。三價鐵離子 (Fe3+) 作為機體內鐵元素的存在形式, 是氧和電子的運輸載體, 承擔著轉運血紅蛋白的重任, 同時也作為輔助因子應用于多數氧化還原酶反應中[2]。Fe3+具有生物毒性, 因此在機體內的含量需嚴格控制, 其細胞毒性與阿爾茨海默氏癥、亨廷頓舞蹈癥及帕金森氏癥等重大疾病密切相關[3]。機體內Fe3+含量較低會導致輸送到細胞的氧氣量不足, 誘發神經疲勞、貧血[4]、肝腎損傷、免疫力下降、機體易感染等諸多問題[5];而細胞中過量的Fe3+會催化活性氧的產生, 從而破壞脂質、核酸和蛋白質[6], 因此對Fe3+含量的動態監控至關重要。目前已有多種鐵離子的檢測方法, 如原子吸收光譜法 (AAS) 、電感耦合等離子體原子發射光譜法 (ICP-AES) 、電感耦合等離子體質譜法 (ICP-MS) 、伏安法及熒光法等[7,8,9,10]。這些方法準確靈敏, 重復性高, 但大多需要昂貴的儀器、復雜的樣品前處理過程以及專業的操作人員, 耗時長且不能實時在線檢測, 不利于Fe3+的動態監測[1], 因此亟需研發一種價廉、簡單快速、操作方便且可實時動態監測Fe3+的方法。

用于Fe3+檢測的“兩面神”型金納米粒子比色傳感器設計

  金納米粒子 (AuNPs) 由于其特殊的理化性質、量子尺寸效應及表面等離子光學特性[11]而備受關注。AuNPs具有制備方法簡單、反應靈敏快速、能可視化分析等優點[12], 被廣泛應用于比色檢測體系中。近年來, 基于AuNPs的Fe3+比色檢測方法的報道逐漸增多。其中, 最常見的是檸檬酸鈉直接修飾的AuNPs檢測Fe3+的方法, 該法通過Fe3+與AuNPs表面的羧酸根 (—COO—) 發生螯合作用導致分散的粒子聚集和溶液顏色變化。還有用多種功能基通過Au—S, Au—N或靜電作用等表面全修飾的AuNPs檢測Fe3+的方法[13]。這些方法采用表面全修飾, 實現了特異性基團與目標物盡可能多的識別而誘導團聚迅速發生。但上述傳統的AuNPs團聚方式非定向且不可控, 極易導致大規模團聚體在溶液中沉降和顏色迅速褪去, 大大降低檢測的穩定性、對外界環境的抗干擾能力和定量檢測的準確性, 且線性范圍較窄[14,15]。另外, 傳統體系一般采用較小粒徑的AuNPs (10~20 nm) 用于Fe3+比色檢測, 其靈敏度較低, 不利于實際樣品中痕量Fe3+的檢測。

  圖1 聚乙二醇 (PEG) 與檸檬酸根不對稱修飾的“兩面神”型金納米粒子 (Janus AuNPs) 比色檢測Fe3+的示意圖
圖1 聚乙二醇 (PEG) 與檸檬酸根不對稱修飾的“兩面神”型金納米粒子 (Janus AuNPs) 比色檢測Fe3+的示意圖

  Fig.1 Principle of PEG and citrate asymmetrically modified gold nanoparticles (Janus AuNPs) -based colorimetric sensor for detection of Fe3+

  為了解決上述問題, 對AuNPs表面進行功能化改性, 使其具備特殊的性能是重要措施之一。惰性基團聚乙二醇 (PEG) 能有效穩定AuNPs, 將PEG不對稱地修飾在AuNPs表面, 可提高粒子在溶液中的穩定性和抗干擾能力。已有文獻報道僅在檢測目標物的量多于AuNPs時才能實現比色檢測, 而增大粒子尺寸, 可有效降低AuNPs摩爾數量, 實現低濃度目標物的檢測[14]。為此, 本文設計制備了一種較大尺寸的PEG與檸檬酸根不對稱修飾的“兩面神”型金納米粒子 (Janus AuNPs) 用于Fe3+的比色檢測。如圖1所示, 將檸檬酸根修飾的AuNPs (下文以AuNPs表示) 固定在玻片上, 利用“ligand exchange”合成策略將惰性的PEG通過巰基形成的Au—S鍵修飾在該AuNPs未與玻片接觸的面上, 借用玻片掩蔽AuNPs表面檸檬酸根位點, 當從玻片表面剝離后, 即得到PEG與檸檬酸根修飾的Janus AuNPs。以該Janus AuNPs比色檢測Fe3+時, 一方面, Janus AuNPs表面修飾的惰性PEG基團可有效穩定大尺寸的AuNPs, 提高靈敏度的同時也使其保持穩定狀態;另一方面, 限定區域的檸檬酸根識別Fe3+, 使粒子以定向可控的方式發生團聚, 多數粒子以二聚體或三聚體的形式穩定存在于溶液中, 有效拓寬了檢測的動態范圍。

  1、 實驗部分

  1.1、 儀器與試劑

  冷場發射型掃描電鏡 (JSM-6701F, 日本電子株式會社) ;激發光動態散射儀 (Zetasizer Nano 3600, 英國馬爾文儀器有限公司) ;紫外-可見分光光度計 (Lambda 35, 美國珀金埃爾默股份有限公司) ;透射電子顯微鏡 (TF20, 美國FEI公司) ;實驗室級超純水器 (OKP-S210超低有機型, 上海淶科實業發展有限公司) 。

  檸檬酸三鈉 (北京化工工業集團有限責任公司) ;三水合氯金酸 (HAuCl4·3H2O) (Sigma-Aldrich公司) ;巰基聚乙二醇 (mPEG-SH, 分子量350, 上海炎怡生物科技有限公司) ;3-氨基丙基-三甲氧基硅烷 (C9H23NO3Si, APTES, 阿拉丁生化科技股份有限公司) ;FeCl3 (天津市百世化工有限公司) ;實驗用水均來自超純水機 (18.2 MΩ· cm-1) 。

  1.2、 金納米粒子合成

  參考文獻中檸檬酸鈉還原氯金酸的方法[16,17,18], 通過調節還原劑用量, 制備不同粒徑的AuNPs。利用冷場發射型掃描電鏡測量了30個粒子的大小, 獲得AuNPs的平均尺寸約為13、25、35 nm。利用紫外分光光度計測定了各自的特征吸收峰, 分別為519、524、529 nm。為了優化AuNPs的粒徑, 將一系列濃度的Fe3+ (10 μL) 添加到檸檬酸根穩定的3種不同粒徑的AuNPs中 (90 μL) , 混合混勻后, 裸眼觀察顏色變化并利用紫外分光光度計迅速記錄吸收光譜變化, 以免形成團聚體發生沉降。

  1.3、 Janus AuNPs制備

  參考文獻方法[17,18]制備PEG與檸檬酸根不對稱修飾的Janus AuNPs。其消光系數為7.66×109 L/mol/cm[19], 利用朗伯比爾定律計算可得Janus AuNPs溶液濃度為0.5 nmol/L。

  1.4、 Janus AuNPs表征

  利用激光動態散射儀記錄溶液電位值;場發射掃描電子顯微鏡獲得粒子形貌圖像;紫外分光光度計記錄反應后紫外吸收光譜圖的變化;透射電子顯微鏡表征粒子結構和得到能譜圖。

  1.5、 AuNPs粒徑優化

  將一系列濃度的Fe3+ (10 μL) 分別加入粒徑為13、25、35 nm的檸檬酸根修飾的AuNPs溶液中 (90 μL) , 利用旋渦混勻器充分混勻, 裸眼觀察顏色變化并利用紫外分光光度計迅速記錄實驗結果。

  1.6、 Janus AuNPs比色檢測Fe3+

  選擇35 nm Janus AuNPs作為最優比色傳感器, 并用于后續實驗中。將一系列梯度濃度的Fe3+ (10 μL) 加入新鮮制備的Janus AuNPs (90 μL, 0。5 nmol/L) 溶液中, 利用旋渦混勻器混勻, Fe3+終濃度分別為1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L;此外, 將1 mmol/L Fe3+ (10 μL) 溶液分別加入35 nm AuNPs及Janus AuNPs的溶液中, 考察PEG非對稱修飾前后傳感器的穩定性, 裸眼觀察溶液顏色變化并記錄紫外吸收光譜結果。

  2、 結果與討論

  2.1、 AuNPs粒徑優化

  AuNPs粒徑是影響比色檢測的關鍵性因素。本文通過制備3種不同粒徑的AuNPs, 考察其檢測Fe3+的靈敏度。在13、25、35 nm的檸檬酸根穩定的AuNPs溶液中分別加入不同濃度的Fe3+得到的溶液顏色變化和紫外吸收光譜圖如圖2, 圖3所示。結果顯示, 13、25、35 nm檸檬酸根穩定的AuNPs對Fe3+的裸眼檢出限分別為500、250、1 μmol/L。隨著粒徑的增大, Fe3+的裸眼檢出限從500 μmol/L降低至1 μmol/L, 紫外光譜圖的變化同樣證實了這一結果。說明增大AuNPs粒徑可顯著提高比色檢測Fe3+的靈敏度。雖然35 nm的上述AuNPs對Fe3+的檢測反應靈敏, 檢出限低, 但由于粒子易形成大規模團聚體而發生沉降, 導致溶液顏色不斷變淺, 30 min內溶液顏色即變為無色透明, 紫外分光光度計難以在恰當的時間內捕捉光譜信號的變化, 不能準確定量目標物 (圖3) 。本文以玻片為載體, 制備了惰性基團PEG與檸檬酸根不對稱修飾的大粒徑Janus AuNPs, 實現了粒子的定向聚集, 同時利用空間位阻使團聚體穩定存在于溶液中。

  2.2、 Janus AuNPs的表征

  對所制備的Janus AuNPs進行表征。如圖4A所示, 固定在玻片上的35 nm Janus AuNPs表面呈紫色, 與AuNPs溶液顏色基本一致, 說明帶負電荷的AuNPs通過靜電作用成功修飾在玻片上。AuNPs和Janus AuNPs的電位值結果如圖4B所示, AuNPs電位值約為-44 mV, Janus AuNPs電位值約為-20 mV, 說明修飾后不帶電荷的PEG基團占據了粒子表面大部分檸檬酸根位點, 使粒子表面電負性減弱。利用紫外分光光度計得到35 nm AuNPs和Janus AuNPs的吸收光譜圖 (圖4C) , 35 nm AuNP在529 nm處具有特征等離子體共振峰, 表面非對稱修飾PEG后, 特征吸收峰紅移到536 nm。這是由于PEG在AuNPs表面產生了致密的單分子層, 直接影響了局域表面等離子體共振的散射半徑, 從而顯著增加了粒子表面局部折射率所致[20,21]。

  圖2 13 nm (A) 和25 nm (B) 檸檬酸根穩定的AuNPs檢測不同濃度Fe3+的照片及吸收光譜圖, 以及不同粒徑AuNPs體系中吸光度比值隨Fe3+濃度變化的趨勢 (C)
圖2 13 nm (A) 和25 nm (B) 檸檬酸根穩定的AuNPs檢測不同濃度Fe3+的照片及吸收光譜圖, 以及不同粒徑AuNPs體系中吸光度比值隨Fe3+濃度變化的趨勢 (C)

  Fig.2 Photographs and optical absorption spectra of 13 nm (A) and 25 nm (B) citrate-stabilized AuNPs in the presence of different concentrations of Fe3+ and the calibration curves of absorption ration versus concentrations of Fe3+ (C)

  concentrations of Fe3+:A:0μmol/L, 500μmol/L, 1 mmol/L, 10 mmol/L;B:0μmol/L, 250μmol/L, 500μmol/L, 1 mmol/L, 10 mmol/L;A0represents the absorbance of the absorption peak of blank AuNPs while A represents the intensity of the newly generated absorption peak after adding Fe3+ (13 nm Au NPs, A/A0=A790/A519;25 nm AuNPs, A/A0=A820/A524)

  圖3 檸檬酸根穩定的AuNPs (35 nm AuNPs) 檢測不同濃度Fe3+的照片及吸收光譜圖 (A) , 35 nm AuNPs檢測1 mmol/L Fe3+的掃描電鏡圖 (B) 以及檢測不同濃度Fe3+時的吸光度比值與濃度的動態響應范圍 (C)
圖3 檸檬酸根穩定的AuNPs (35 nm AuNPs) 檢測不同濃度Fe3+的照片及吸收光譜圖 (A) , 35 nm AuNPs檢測1 mmol/L Fe3+的掃描電鏡圖 (B) 以及檢測不同濃度Fe3+時的吸光度比值與濃度的動態響應范圍 (C)

  Fig。3 Photographs and absorption spectra of citrate-stabilized AuNPs (35 nm AuNPs) after the addition of different concentrations of Fe3+ (A) , the representative scanning electron microscopic (SEM) image of 35 nm AuNPs for detection of 1 mmol/L Fe3+ (B) and the calibration curve of absorption ratio versus concentrations of Fe3+ (C)

  concentrations of Fe3+:0μmol/L, 1μmol/L, 10μmol/L, 100μmol/L, 1 mmol/L, 10 mmol/L

  圖4 固定在載玻片上的Janus AuNPs (A) 、35 nm AuNPs和Janus AuNPs的電位值 (B) 以及 35 nm AuNPs和Janus AuNPs的吸收光譜圖 (C)
圖4 固定在載玻片上的Janus AuNPs (A) 、35 nm AuNPs和Janus AuNPs的電位值 (B) 以及 35 nm AuNPs和Janus AuNPs的吸收光譜圖 (C)

  Fig.4 Photograph of Janus AuNPs immobilized on glass slide (A) , Zeta potential measurement of 35 nm AuNPs and Janus AuNPs (B) and normalized optical absorption spectra of 35 nm AuNPs and Janus AuNPs (C)

  對比了AuNPs, PEG全修飾的AuNPs (PEG-AuNPs) 及Janus AuNPs的TEM透射電鏡圖 (圖5) , 由圖可知, AuNPs表面沒有PEG分子層 (圖5A) , PEG修飾的AuNPs表面明顯包裹著1~2 nm厚度的PEG分子層 (圖5B) ;而Janus AuNPs形成的三聚體在有限區域發生定向聚集, 表面大部分區域包裹PEG分子層 (圖5C) 。對比結果說明PEG在Janus AuNPs表面成功實現了非對稱修飾。進一步觀察能譜圖 (圖6) , 發現AuNPs表面含有氧元素而不含硫元素, 說明只存在檸檬酸根, 而Janus AuNPs表面有硫元素和氧元素, 說明PEG已通過Au—S鍵修飾到粒子表面。上述表征結果證實了Janus AuNPs為惰性基團PEG非對稱修飾的粒子結構, 其表面檸檬酸根可在限定區域與Fe3+產生螯合作用, 誘導粒子定向聚集, 實現目標物穩定、準確的定量檢測。

  圖5 35 nm AuNPs (A) 、PEG-AuNPs (B) 及Janus AuNPs (C) 的TEM透射電鏡圖
圖5 35 nm AuNPs (A) 、PEG-AuNPs (B) 及Janus AuNPs (C) 的TEM透射電鏡圖

  Fig。5 Transmission electron microscopyic (TEM) images of 35 nm AuNPs (A) , PEG-AuNPs (B) and Janus AuNPs (C)

  圖6 35 nm AuNPs (A) 及Janus AuNPs (B) 的EDS能譜圖
圖6 35 nm AuNPs (A) 及Janus AuNPs (B) 的EDS能譜圖

  Fig.6 Energy dispersive spectra (EDS) of 35 nm AuNPs (A) and Janus AuNPs (B)

  2.3、 Janus AuNPs比色檢測Fe3+的靈敏度

  探討Janus AuNPs比色檢測Fe3+的靈敏度并與35 nm AuNPs在相同條件下進行對比。在Janus AuNPs溶液中加入系列梯度濃度 (1 μmol/L、10 μmol/L、100 μmol/L、1 mmol/L、10 mmol/L) 的Fe3+, 溶液顏色由紫色明顯變化到灰色, 同時其在536 nm處的特征吸收峰吸光度值逐漸降低, 因粒子團聚形成的750 nm處的吸光度值逐漸增加, 結果如圖7A所示。掃描電鏡圖 (圖7B) 顯示, 當加入1 mmol/L目標物后Janus AuNPs大多以定向可控的方式進行團聚, 形成二聚體或三聚體并穩定存在于溶液中, 出現750 nm處的吸收峰。隨著Fe3+濃度的增加, 形成的寡聚體數目增加, 750 nm處吸光度值逐漸上升。根據紫外光譜圖可得到750 nm與536 nm處的吸光度比值A750/A536 (y) 與Fe3+濃度 (x) 在1 μmol/L~10 mmol/L范圍的校正曲線, 二者在較寬的濃度范圍內呈線性, 線性方程為y=0.129x+0.317, 相關系數r為0.98 (圖7C) 。根據檢出限計算公式LOD=3σ/S得到LOD為715 nmol/L, 比同等條件下13 nm AuNPs檢出限降低500倍左右。在相同條件下將同等濃度的Fe3+加入到35 nm AuNPs溶液中, 結果如圖3所示。當加入1 μmol/L低濃度Fe3+時, 溶液顏色迅速改變, 粒子發生團聚, 說明增大粒子尺寸可顯著提高檢測靈敏度。由于表面未修飾PEG基團, AuNPs以非定向不可控的方式發生團聚[17], 形成如圖3B所示的易于發生沉降的大規模團聚體。當Fe3+濃度高于10 mmol/L時, AuNPs溶液顏色變化基本一致, 均由紫色變為灰色, 且750 nm處吸光度值基本保持恒定 (圖3A, 3C) 。該結果說明團聚行為已達到飽和, 無新的團聚體形成。根據紫外光譜圖中得到吸光度比值A750/A529與Fe3+濃度在1 μmol/L~10 mmol/L的變化曲線, 發現二者呈非線性的變化趨勢, 無法得到線性方程用于準確定量目標物濃度 (圖3C) 。這是由于粒子以非定向方式團聚后形成的大規模團聚體極易發生沉降, 導致溶液顏色迅速消失, 紫外分光光度計難以在恰當的時間捕捉檢測信號。但Janus AuNPs團聚后粒子大多以寡聚體形式存在, 團聚體數目隨著Fe3+濃度的上升而不斷增加, 使溶液顏色穩定變化并得到相應的紫外吸收光譜, 可用于目標物的準確定量。

  2.4、 Janus AuNPs比色檢測Fe3+的穩定性

  對比研究了Janus AuNPs與AuNPs傳感器的穩定性。在同樣條件下將1 mmol/L Fe3+分別加入兩類傳感器中, 監測溶液顏色和吸光度值A750隨時間的變化, 結果如圖8所示。AuNPs溶液中粒子迅速團聚形成大規模團聚體, 且溶液顏色迅速變為灰色, 750 nm處的吸光度值在10 s內迅速上升, 但1 min后即發生沉降, 溶液顏色不斷褪去, 吸光度值亦迅速下降, 60 min后溶液已呈無色透明狀態, 吸光度值接近于零 (圖8A, 8C) 。相比之下, Janus AuNPs溶液中團聚體多以寡聚體形式存在, 溶液顏色逐漸變為灰色, 在750 nm處的吸光度值穩定變化, 5 min內即達到恒定值, 溶液顏色和吸收峰值在60 min內無明顯下降, 形成的團聚體不易沉降 (圖8B, 8C) 。這是由于PEG對AuNPs具有很強的穩定作用, 不僅能維持AuNPs寡聚體的穩定還能抵抗外界環境的干擾。上述結果足以證實惰性的PEG基團在AuNPs表面的非對稱修飾極大地提高了傳感器的穩定性。此外, 與文獻中利用納米粒子比色傳感器檢測Fe3+的工作相比 (表1) , 本方法檢出限低, 線性范圍寬。

  圖7 Janus AuNPs檢測不同濃度Fe3+的照片和吸收光譜圖 (A) , Janus AuNPs檢測1 mmol/L Fe3+的掃描電鏡圖 (B) 與檢測不同濃度Fe3+時的吸光度比值與濃度的動態響應范圍 (C)
圖7 Janus AuNPs檢測不同濃度Fe3+的照片和吸收光譜圖 (A) , Janus AuNPs檢測1 mmol/L Fe3+的掃描電鏡圖 (B) 與檢測不同濃度Fe3+時的吸光度比值與濃度的動態響應范圍 (C)

  Fig.7 Photographs and absorption spectra of Janus AuNPs after the addition of different concentrations of Fe3+ (A) , the representative SEM image of Janus AuNPs for detection of 1 mmol/L Fe3+ (B) and the calibration curve of absorption ratio versus concentrations of Fe3+ (C)

  concentrations of Fe3+:0μmol/L, 1μmol/L, 10μmol/L, 100μmol/L, 1 mmol/L, 10 mmol/L

  圖8 35 nm AuNPs (A) 和Janus AuNPs (B) 檢測1 mmol/L Fe3+時吸收光譜隨時間變化圖及A750隨時間變化動態趨勢 (C)
圖8 35 nm AuNPs (A) 和Janus AuNPs (B) 檢測1 mmol/L Fe3+時吸收光譜隨時間變化圖及A750隨時間變化動態趨勢 (C)

  Fig。8 Absorption spectra of 35 nm AuNPs (A) and Janus AuNPs (B) along with time upon detection of 1 mmol/L Fe3+, and changes of A750 (C) corresponding to the absorption spectra of (A) and (B) , respectively

  表1 利用納米粒子比色傳感器檢測Fe3+的方法比較
表1 利用納米粒子比色傳感器檢測Fe3+的方法比較

  3、 結 論

  本文設計制備了一種新型的惰性PEG與檸檬酸根不對稱修飾的大粒徑Janus AuNPs比色傳感器。該傳感器可顯著提高Fe3+檢測的靈敏度, 比傳統小粒徑AuNPs的檢出限降低500倍左右;其原理在于PEG基團占據了AuNPs表面的大部分位點, 剩余少量的檸檬酸根位點與Fe3+產生螯合, 在限域里誘導粒子發生定向可控聚集, 并形成寡聚體存在于溶液中, 從而顯著提高了比色檢測的穩定性, 并拓寬了線性范圍。

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